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組織線粒體分離試劑盒   蛋白抽提

組織線粒體分離試劑盒 蛋白抽提

簡要描述:

組織線粒體分離試劑盒 蛋白抽提組織線粒體分離試劑盒(Mitochondria Isolation Kit for Tissue)是一款快速便捷的分離動物組織線粒體的試劑盒。本試劑盒在分離線粒體的同時,還能獲得不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白,可用于分析細(xì)胞se素c等線粒體蛋白向胞漿的釋放

產(chǎn)品時間:2024-05-22

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Mitochondria Isolation Kit for Tissue

組織線粒體分離試劑盒



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產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

價格(元)

組織線粒體分離試劑盒

MP1554-50T

50T

560

組織線粒體分離試劑盒

MP1554-100T

100T

960


基本描述

組織線粒體分離試劑盒(Mitochondria Isolation Kit for Tissue)是一款快速便捷的分離動物組織線粒體的試劑盒。本試劑盒在分離線粒體的同時,還能獲得不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白,可用于分析細(xì)胞se素c等線粒體蛋白向胞漿的釋放。經(jīng)本試劑盒獲得的大部分線粒體都含有完整的內(nèi)膜和外膜,且維持線粒體生理功能,因此,分離所得的線粒體可用于線粒體膜電位等生理功能相關(guān)研究。另外,分離得到的線粒體也可被線粒體裂解液或其它適當(dāng)裂解液裂解后用于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。

本試劑盒適用于動物軟組織(比如:肝臟、腦)和硬組織(比如:心肌、骨骼?。┑木€粒體提取,但采用本試劑盒提取硬組織線粒體效果不佳,建議選用硬組織線粒體分離試劑盒(貨號:MP1555-50T)。


產(chǎn)品組分

組分編號

組分名稱

保存方法

貨號(規(guī)格)

MP1554-50T

MP1554-100T

MP1554-A

Mitochondria Lysis Buffer線粒體裂解液

-20℃

100ml

2×100ml

MP1554-B

Mitochondria Stock Buffer線粒體保存液

-20℃

10ml

2×10ml

MP1554-C

Protein Stock Buffer (5×)蛋白保存液(5×)

RT

10ml

2×10ml

MP1554-D

PMSF (100×)蛋白酶抑制劑

-20℃

1.5ml

2×1.5ml


保存與運(yùn)輸方法

保存:-20℃保存,1年穩(wěn)定。

運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。


注意事項(xiàng)

1) 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前務(wù)必閱讀試劑盒操作流程,根據(jù)最終實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇試劑盒內(nèi)所要用到的試劑。

2) 若不是用于制備線粒體蛋白樣品,不必往線粒體裂解液和清洗液中加PMSF。

3) 分離線粒體的所有步驟均需在冰上或4℃進(jìn)行,所用溶液需冰浴或4℃預(yù)冷,全部操作時間盡量控制在1h之內(nèi)。

4) 通常,在分離線粒體時前后兩次離心速度選取600g和12,000g,如果希望純度更高,但對線粒體的得率要求不高,前后兩次離心速度可以采用2000g和6000g。

5) 試劑開封后請盡快使用,以免影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)效果。

6) 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


自備材料

1)(可選)BCA蛋白定量檢測試劑盒或Bradford蛋白濃度測定試劑盒

2)PBS

3)低速離心機(jī)

4)勻漿器


使用方法

1. 試劑準(zhǔn)備:從冰箱取出所需試劑置于室溫融解,之后立即置于冰上待用。需要注意,如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菫榱酥苽渚€粒體蛋白樣品,需在線粒體裂解緩沖液和清洗液內(nèi)添加PMSF (100×),使其終濃度為PMSF (1×)。PMSF一定要在試劑加入到樣品前1-2min內(nèi)加入,以免PMSF在水溶液中失效。

2. 清洗:取新鮮組織(不宜采用凍存組織),迅速稱重50~100mg,用預(yù)冷的PBS清洗1次,于冰上剪成3mm2大小的組織碎片。

3. 裂解:加入10倍體積預(yù)冷的線粒體裂解液,置于冰浴上Dounce勻漿器中,勻漿10-20次。不同組織或不同勻漿器所需的勻漿次數(shù)有所不同,需自行優(yōu)化?!咀⒁狻浚喝绻M織重量為100mg,可以粗略認(rèn)為組織的體積接近100μl,此時需加入1000μl線粒體裂解液。

4. 離心:把勻漿在4℃ 600g離心5min以去除細(xì)胞核、未破碎細(xì)胞和大的膜碎片?!咀⒁狻浚喝缧璜@得純度更高的線粒體,可以將此步驟的離心速度改為2000g離心3min,缺點(diǎn)是相同數(shù)量細(xì)胞的線粒體抽提得率會下降。

5. 上清液轉(zhuǎn)移至一干凈離心管,4℃ 12000g離心10min。【注意】:如需獲得純度更高的線粒體,可以將此步驟的離心速度改為6000g離心10min,缺點(diǎn)是相同數(shù)量細(xì)胞的線粒體抽提得率會下降。

6. 棄上清,沉淀即為線粒體。【注意】:如果希望獲得去除線粒體后的細(xì)胞漿蛋白,應(yīng)在本步驟中收集上清,且在收集上清的過程中不要觸及沉淀,隨后把收集的上清4℃ 12000g離心10min,此時的上清即為去除線粒體的細(xì)胞漿蛋白。

7. 保存:棄上清,用適當(dāng)?shù)木彌_液懸浮沉淀。如果用于線粒體酶活性或功能分析,線粒體沉淀需重懸于線粒體保存液中;如果用于細(xì)胞漿蛋白的分析,獲得的細(xì)胞漿蛋白應(yīng)保存于蛋白保存液(1×),即按照:細(xì)胞漿蛋白:蛋白保存液(5×)=4:1比例混合;如果用于雙向電泳,應(yīng)使用其它適宜的保存液。

【注意】:使用本試劑盒中的線粒體儲存液稀釋或儲存的線粒體樣品應(yīng)及時使用,以免線粒體膜電位受影響。如果不能及時使用,建議在-80℃保存。凍存后的線粒體樣品不推薦用于膜電位的檢測,但可以用線粒體蛋白或核酸的相關(guān)檢測。


相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

MP1610-1ML

廣譜型蛋白酶抑制劑混合物(不含EDTA,100× DMSO儲液)

1ml

MP1553-50T

Mitochondria Isolation Kit for Cultured Cells細(xì)胞線粒體分離試劑盒

50T

MP1554-50T

Mitochondria Isolation Kit for Tissue組織線粒體分離試劑盒

50T

MP1555-50T

Mitochondria Isolation Kit for Hard Tissue硬組織線粒體分離試劑盒

50T

MP1601-1ML

PMSF (100mM)

1ml

MP1902-500T

Enhanced BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強(qiáng)型)

500T

MP1903-500T

Bradford Protein Quantification Kit Bradford蛋白濃度測定試劑盒

500T


— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】



上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。




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